① 噬菌体的Dna可不可以做质粒
不可以。
质粒存在于原核细胞细胞质内,而噬菌体是病毒,不具备细胞结构。
② 什么是噬菌粒
噬菌粒(phagemid)实际上是带有丝状噬菌体大间隔区的质粒载体,是集质粒和丝状噬菌体的有利特征于一身的载体,具有ColEI复制起点及抗生素抗性选择标记的质粒,以及丝状体噬菌体的间隔区。此间隔区含噬菌体DNA合成的起始与终止及噬菌体颗粒形态发生所必需的全部顺式作用序列。
含噬菌粒的细菌被噬菌体感染后,启动滚环复制产生单链DNA(ssDNA)并进行包装。克隆于这些载体内的外源DNA区段可以像质粒一样用常规方法进行增殖,而带有这种质粒的细菌被M13(或f1)丝状噬菌体感染后,在病毒的基因影响下,质粒的复制方式发生改变。
基因的产物与质粒所携带的基因间隔区相互作用,启动滚环复制,产生质粒DNA一条链的拷贝,最终包装在子代噬菌体颗粒中。pUC118和pUC119是功能比较完善的噬菌粒载体,对外源DNA片段的大小不敏感,并且保留了pUC质粒在克隆操作方面的优点,噬菌体质粒在寄主细胞内以质粒形式存在,复制产生双链DNA。当用辅助噬菌体M13感染宿主细胞后,噬菌体质粒的复制就转变成如同M13噬菌体一样的滚环复制,产生单链DNA并被包装噬菌体粒子,以出芽方式释放至胞外。
噬菌体质粒载体在应用上具有许多优点:①载体本身分子小,约为3000bp,便于分离和操作;②克隆外源DNA容量较M13噬菌体载体大,可克隆10kb外源DNA片段;③可用于制备单链或双链DNA,克隆和表达外源基因。
③ 为什么受体细胞是大肠杆菌时选用质粒和噬菌体作载体
载体的主来要用途是将目的基因带源入受体细胞且对受体细胞的生存不会产生太大影响。
大肠杆菌里本来就有质粒,换句话说,质粒可以从大肠杆菌里提取出来;而用噬菌体的宿主细胞就是大肠杆菌。所以受体细胞是大肠杆菌时通常选用质粒和噬菌体作载体。
④ 噬菌体和质粒组成元素相同吗
您好!不太一样。
① 噬菌体一般由蛋白外壳及内含的核酸(包括RNA、DNA)组成。
② 质粒就版是一个闭合环状能独权立复制的双链DNA。
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⑤ 噬菌体克隆载体是怎样构成的
(1)λ噬菌体克隆载体:λ噬菌体由DNA(λDNA)和外壳蛋白组成,对大肠杆菌具有很高的感染能力。λDNA在噬菌体中以线状双链DNA分子存在,全长48502bp。其左右两端各有12个核苷酸组成的5′凸出黏性末端(cohesive:end),而且两者的核苷酸序列互补,进入宿主细胞后,黏性末端连接成为环状DNA分子。把此末端称为emphasis:role=italiccosemphasis位点(cohesive:end:site)。
并且λDNA上约有20kb的区域,约占总长度13的区段对λ噬菌体的生长不是绝对需要的,可以缺失或被外源DNA片段取代,这就是用λDNA构建克隆载体的依据。构建λ噬菌体克隆载体的策略是:①用合适的限制性内切核酸酶切去λDNA上的部分或全部非必需区,相应保留这种酶的1个或2个识别位点作为克隆位点,并用点突变或甲基化酶处理等方法使必需区内的这种酶的识别序列失效,避免外源DNA片段插入必需区;②若有必要可在非必需区插入选择标记基因;③构建的λDNA载体不应小于36.4kb。
(2)λ噬菌体载体的主要类型:λ噬菌体载体分两类,即插入型载体和置换型载体。通过特定的酶切位点允许外源DNA片段插入的载体称为插入型载体(insertion:vectors)。由于λ噬菌体对所包装的DNA有大小的限制,因此一般插入型载体设计为可插入6kb外源DNA片段,最大11kb。允许外源DNA片段替换非必须DNA片段的载体,称为置换型载体。一般情况下,置换型载体克隆外源片段的大小范围是923kb,故而该载体主要用来构建基因组文库。λ-DNA作为载体的优点:①λ-DNA可在体外包装成噬菌体颗粒,能高效转染大肠杆菌;②λ-DNA载体的装载能力最大为25kb,超过质粒的装载量;③重组λ-DNA分子的提取和筛选较为方便;④λ-DNA载体适合克隆和扩增外源DNA片段,但不适合表达外源基因。
(3)λ噬菌体载体的主要应用:λ噬菌体载体属于克隆载体,主要用于克隆DNA片段、构建cDNA文库和基因组文库,并从中筛选目标基因,也可用在大容量载体(如黏粒)中增殖的外源DNA片段和亚克隆。
λ噬菌体载体克隆外源DNA片段的原理与质粒载体的工作原理是类似的,只是在形式上有许多差别。载体和外源DNA片段经过酶切以后,外源DNA片段插入到载体的适当位置,或置换载体的填充片段。这种连接后的重组DNA仍保留增殖性能,但由于分子量太大,不能像重组质粒DNA那样可通过转化方法进入大肠杆菌。一般可通过提取λ噬菌体的蛋白质外壳,将在体外重组的噬菌体DNA进行包装,形成噬菌体颗粒。这样的噬菌体颗粒保留对大肠杆菌的感染能力,从而可将被包装的重组噬菌体DNA注射到宿主菌中,通过宿主菌的裂解生长,可增殖重组噬菌体。在构建基因文库时,不同的重组噬菌体DNA经过裂解生长过程最终形成大量的噬菌斑,这些噬菌斑的集合,就构成了基因文库,用λ噬菌体载体构建基因文库时,文库是以噬菌斑的形式存在的,而质粒载体构建的文库是以菌落的形式存在的。λ噬菌体载体用转导法可使1μg重组DNA分子获得10superscript6superscript个以上的噬菌斑,适合用于建立cDNA基因文库,也可用于克隆外源目的基因。
⑥ 说明什么是噬菌体质粒,构建该载体的原理及用途
载体条件:
① 分子量小,携带外源DNA片段进入受体细胞;
② 复制子,能独立于染色体进行自主复制;
③ 多克隆位点(MCS);
④ 标记基因,便于选择;
⑤ 拷贝数高,易于分离;
⑥ 安全。
λDNA的特点
① ?噬菌体为温和噬菌体。
② ?DNA为双链线性DNA,长度为48502 bp,具有多种限制酶的识别序列,便于外源DNA片段的插入和置换.
③两端有cos位点,可以环化。
cos位点(cohensive-end site): ?DNA两端各有12bp的粘性末端,粘性末端形成的双链区域称为cos位点。λ噬菌体基因组特点
?DNA上有66个基因,有一半是必需的,与自身的活动有关;其他约1/3是非必需基因。
λ噬菌体载体的优点
比一般质粒载体容量大的多,可达20kb;
体外包装反应效力高,通常比质粒载体克隆效率
高100倍,适于构建cDNA文库和真核生物基因组文库
⑦ pbr322质粒是一种什么样的载体粘粒质粒噬菌体
pbr322质粒是一种什么样的载体粘粒质粒噬菌体
载体种类:质粒、噬菌体、腺病毒载体、逆转录病毒载体 质粒特点: 存在于细菌染色体外的小型环状DNA分子。 具有自我复制功能。 带有抗性基因及表型识别等遗传性标记物。 经改造后具有多克隆位点。 举例:pMD-18T质粒、pUCl9质粒、pBR322质粒等
在基因工程中,常用人工构建的质粒作为载体.人工构建的质粒可以集多种有用的特征于一体,如含多种单一酶切位点、抗生素耐药性等.常用的人工质粒运载体有pBR322、pSC101.pBR322含有抗四环素基因(Tcr)和抗氨苄青霉素基因(Apr),并含有27种限制性内切酶的单一识别位点.如果将DNA片段插入EcoRI切点,不会影响两个抗生素基因的表达.但是如果将DNA片段插入到Hind III、Bam H I 或 Sal I切点,就会使抗四环素基因失活.这时,含有DNA插入片段的pBR322将使宿主细菌抗氨苄青霉素,但对四环素敏感.没有DNA插入片段的pBR322会使宿主细菌既抗氨苄青霉素又抗四环素,而没有pBR322质粒的细菌将对氨苄青霉素和四环素都敏感.pSC101与pBR322相似,只是没有抗氨苄青霉素基因和PstI切点.质粒运载体的最大插入片段约为10 kb(kb表示为千碱基对). 1973年,科学家将质粒作为基因的载体使用,为基因工程的诞生奠定了基础.最常用的质粒是大肠杆菌的质粒.这种质粒常含有抗生素抗性基因,例如,卡那霉素抗性基因
⑧ 噬菌粒载体是由噬菌体和质粒载体重组而成的么
噬菌粒是一类人工构建的含有单链噬菌体包装序列、复制子以及质粒复制子、克隆专位点、标记基因的属特殊类型的载体。它是包含了丝状噬菌体大间隔区域的质粒,是一种双链质粒,含噬菌体来源的复制子,在细菌的细胞中出现有辅助噬菌体的情况下,可被诱导成单链DNA噬菌粒,同时具有噬菌体和质粒的特征,可以像噬菌体或质粒一样复制。它兼具丝状噬菌体与质粒载体的优点。
噬菌粒具有以下令人瞩目的特征:1.双链DNA既稳定又高产,具有常规质粒的特征;2.免除了将外缘DNA片段从质粒亚克隆于噬菌体载体这一繁琐又费时的步骤;3.由于载体足够小,故可得到长达10kb的外源DNA区段的单链。
⑨ 以pembl8为例,说明什么是噬菌体质粒,构建该载体的原理及用途
质粒载体主要用于DNA分子的亚克隆,表达外源蛋白,DNA序列的测定和基因的体外重新构建等。优点:1.与外源DNA重组操作简便;2.外源DNA在质粒载体中相对较稳定,3.质粒DNA的制备和纯化方便,快速简单,所以得到广泛应用。缺点:1.它容纳外源DNA片段有限,通常最多为15kb左右,因为当质粒大于15kb时,转化效率明显下降。质粒载体与外源DNA重组原理见图1。
⑩ 能从感染噬菌体的菌种中体质粒做转化吗
噬菌体是病毒的一种,其特别之处是专以细菌为宿主,较为人知的噬菌体是以大肠杆菌为寄主的T2噬菌体。跟别的病毒一样,噬菌体只是一团由蛋白质外壳包裹的遗传物质,大部分噬菌体还长有“尾巴”,用来将遗传物质注入宿主体内。噬菌体是一种普遍存在的生物体,而且经常都伴随着细菌。