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噬菌體質粒

發布時間:2020-11-23 23:02:44

① 噬菌體的Dna可不可以做質粒

不可以。
質粒存在於原核細胞細胞質內,而噬菌體是病毒,不具備細胞結構。

② 什麼是噬菌粒

噬菌粒(phagemid)實際上是帶有絲狀噬菌體大間隔區的質粒載體,是集質粒和絲狀噬菌體的有利特徵於一身的載體,具有ColEI復制起點及抗生素抗性選擇標記的質粒,以及絲狀體噬菌體的間隔區。此間隔區含噬菌體DNA合成的起始與終止及噬菌體顆粒形態發生所必需的全部順式作用序列。

含噬菌粒的細菌被噬菌體感染後,啟動滾環復制產生單鏈DNA(ssDNA)並進行包裝。克隆於這些載體內的外源DNA區段可以像質粒一樣用常規方法進行增殖,而帶有這種質粒的細菌被M13(或f1)絲狀噬菌體感染後,在病毒的基因影響下,質粒的復制方式發生改變。

基因的產物與質粒所攜帶的基因間隔區相互作用,啟動滾環復制,產生質粒DNA一條鏈的拷貝,最終包裝在子代噬菌體顆粒中。pUC118和pUC119是功能比較完善的噬菌粒載體,對外源DNA片段的大小不敏感,並且保留了pUC質粒在克隆操作方面的優點,噬菌體質粒在寄主細胞內以質粒形式存在,復制產生雙鏈DNA。當用輔助噬菌體M13感染宿主細胞後,噬菌體質粒的復制就轉變成如同M13噬菌體一樣的滾環復制,產生單鏈DNA並被包裝噬菌體粒子,以出芽方式釋放至胞外。

噬菌體質粒載體在應用上具有許多優點:①載體本身分子小,約為3000bp,便於分離和操作;②克隆外源DNA容量較M13噬菌體載體大,可克隆10kb外源DNA片段;③可用於制備單鏈或雙鏈DNA,克隆和表達外源基因。

③ 為什麼受體細胞是大腸桿菌時選用質粒和噬菌體作載體

載體的主來要用途是將目的基因帶源入受體細胞且對受體細胞的生存不會產生太大影響。

大腸桿菌里本來就有質粒,換句話說,質粒可以從大腸桿菌里提取出來;而用噬菌體的宿主細胞就是大腸桿菌。所以受體細胞是大腸桿菌時通常選用質粒和噬菌體作載體。

④ 噬菌體和質粒組成元素相同嗎

您好!不太一樣。
① 噬菌體一般由蛋白外殼及內含的核酸(包括RNA、DNA)組成。
② 質粒就版是一個閉合環狀能獨權立復制的雙鏈DNA。

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⑤ 噬菌體克隆載體是怎樣構成的

(1)λ噬菌體克隆載體:λ噬菌體由DNA(λDNA)和外殼蛋白組成,對大腸桿菌具有很高的感染能力。λDNA在噬菌體中以線狀雙鏈DNA分子存在,全長48502bp。其左右兩端各有12個核苷酸組成的5′凸出黏性末端(cohesive:end),而且兩者的核苷酸序列互補,進入宿主細胞後,黏性末端連接成為環狀DNA分子。把此末端稱為emphasis:role=italiccosemphasis位點(cohesive:end:site)。

並且λDNA上約有20kb的區域,約占總長度13的區段對λ噬菌體的生長不是絕對需要的,可以缺失或被外源DNA片段取代,這就是用λDNA構建克隆載體的依據。構建λ噬菌體克隆載體的策略是:①用合適的限制性內切核酸酶切去λDNA上的部分或全部非必需區,相應保留這種酶的1個或2個識別位點作為克隆位點,並用點突變或甲基化酶處理等方法使必需區內的這種酶的識別序列失效,避免外源DNA片段插入必需區;②若有必要可在非必需區插入選擇標記基因;③構建的λDNA載體不應小於36.4kb。

(2)λ噬菌體載體的主要類型:λ噬菌體載體分兩類,即插入型載體和置換型載體。通過特定的酶切位點允許外源DNA片段插入的載體稱為插入型載體(insertion:vectors)。由於λ噬菌體對所包裝的DNA有大小的限制,因此一般插入型載體設計為可插入6kb外源DNA片段,最大11kb。允許外源DNA片段替換非必須DNA片段的載體,稱為置換型載體。一般情況下,置換型載體克隆外源片段的大小范圍是923kb,故而該載體主要用來構建基因組文庫。λ-DNA作為載體的優點:①λ-DNA可在體外包裝成噬菌體顆粒,能高效轉染大腸桿菌;②λ-DNA載體的裝載能力最大為25kb,超過質粒的裝載量;③重組λ-DNA分子的提取和篩選較為方便;④λ-DNA載體適合克隆和擴增外源DNA片段,但不適合表達外源基因。

(3)λ噬菌體載體的主要應用:λ噬菌體載體屬於克隆載體,主要用於克隆DNA片段、構建cDNA文庫和基因組文庫,並從中篩選目標基因,也可用在大容量載體(如黏粒)中增殖的外源DNA片段和亞克隆。

λ噬菌體載體克隆外源DNA片段的原理與質粒載體的工作原理是類似的,只是在形式上有許多差別。載體和外源DNA片段經過酶切以後,外源DNA片段插入到載體的適當位置,或置換載體的填充片段。這種連接後的重組DNA仍保留增殖性能,但由於分子量太大,不能像重組質粒DNA那樣可通過轉化方法進入大腸桿菌。一般可通過提取λ噬菌體的蛋白質外殼,將在體外重組的噬菌體DNA進行包裝,形成噬菌體顆粒。這樣的噬菌體顆粒保留對大腸桿菌的感染能力,從而可將被包裝的重組噬菌體DNA注射到宿主菌中,通過宿主菌的裂解生長,可增殖重組噬菌體。在構建基因文庫時,不同的重組噬菌體DNA經過裂解生長過程最終形成大量的噬菌斑,這些噬菌斑的集合,就構成了基因文庫,用λ噬菌體載體構建基因文庫時,文庫是以噬菌斑的形式存在的,而質粒載體構建的文庫是以菌落的形式存在的。λ噬菌體載體用轉導法可使1μg重組DNA分子獲得10superscript6superscript個以上的噬菌斑,適合用於建立cDNA基因文庫,也可用於克隆外源目的基因。

⑥ 說明什麼是噬菌體質粒,構建該載體的原理及用途

載體條件:
① 分子量小,攜帶外源DNA片段進入受體細胞;
② 復制子,能獨立於染色體進行自主復制;
③ 多克隆位點(MCS);
④ 標記基因,便於選擇;
⑤ 拷貝數高,易於分離;
⑥ 安全。
λDNA的特點
① ?噬菌體為溫和噬菌體。
② ?DNA為雙鏈線性DNA,長度為48502 bp,具有多種限制酶的識別序列,便於外源DNA片段的插入和置換.
③兩端有cos位點,可以環化。
cos位點(cohensive-end site): ?DNA兩端各有12bp的粘性末端,粘性末端形成的雙鏈區域稱為cos位點。λ噬菌體基因組特點
?DNA上有66個基因,有一半是必需的,與自身的活動有關;其他約1/3是非必需基因。
λ噬菌體載體的優點
比一般質粒載體容量大的多,可達20kb;
體外包裝反應效力高,通常比質粒載體克隆效率
高100倍,適於構建cDNA文庫和真核生物基因組文庫

⑦ pbr322質粒是一種什麼樣的載體粘粒質粒噬菌體

pbr322質粒是一種什麼樣的載體粘粒質粒噬菌體
載體種類:質粒、噬菌體、腺病毒載體、逆轉錄病毒載體 質粒特點: 存在於細菌染色體外的小型環狀DNA分子。 具有自我復制功能。 帶有抗性基因及表型識別等遺傳性標記物。 經改造後具有多克隆位點。 舉例:pMD-18T質粒、pUCl9質粒、pBR322質粒等
在基因工程中,常用人工構建的質粒作為載體.人工構建的質粒可以集多種有用的特徵於一體,如含多種單一酶切位點、抗生素耐葯性等.常用的人工質粒運載體有pBR322、pSC101.pBR322含有抗四環素基因(Tcr)和抗氨苄青黴素基因(Apr),並含有27種限制性內切酶的單一識別位點.如果將DNA片段插入EcoRI切點,不會影響兩個抗生素基因的表達.但是如果將DNA片段插入到Hind III、Bam H I 或 Sal I切點,就會使抗四環素基因失活.這時,含有DNA插入片段的pBR322將使宿主細菌抗氨苄青黴素,但對四環素敏感.沒有DNA插入片段的pBR322會使宿主細菌既抗氨苄青黴素又抗四環素,而沒有pBR322質粒的細菌將對氨苄青黴素和四環素都敏感.pSC101與pBR322相似,只是沒有抗氨苄青黴素基因和PstI切點.質粒運載體的最大插入片段約為10 kb(kb表示為千鹼基對). 1973年,科學家將質粒作為基因的載體使用,為基因工程的誕生奠定了基礎.最常用的質粒是大腸桿菌的質粒.這種質粒常含有抗生素抗性基因,例如,卡那黴素抗性基因

⑧ 噬菌粒載體是由噬菌體和質粒載體重組而成的么

噬菌粒是一類人工構建的含有單鏈噬菌體包裝序列、復制子以及質粒復制子、克隆專位點、標記基因的屬特殊類型的載體。它是包含了絲狀噬菌體大間隔區域的質粒,是一種雙鏈質粒,含噬菌體來源的復制子,在細菌的細胞中出現有輔助噬菌體的情況下,可被誘導成單鏈DNA噬菌粒,同時具有噬菌體和質粒的特徵,可以像噬菌體或質粒一樣復制。它兼具絲狀噬菌體與質粒載體的優點。
噬菌粒具有以下令人矚目的特徵:1.雙鏈DNA既穩定又高產,具有常規質粒的特徵;2.免除了將外緣DNA片段從質粒亞克隆於噬菌體載體這一繁瑣又費時的步驟;3.由於載體足夠小,故可得到長達10kb的外源DNA區段的單鏈。

⑨ 以pembl8為例,說明什麼是噬菌體質粒,構建該載體的原理及用途

質粒載體主要用於DNA分子的亞克隆,表達外源蛋白,DNA序列的測定和基因的體外重新構建等。優點:1.與外源DNA重組操作簡便;2.外源DNA在質粒載體中相對較穩定,3.質粒DNA的制備和純化方便,快速簡單,所以得到廣泛應用。缺點:1.它容納外源DNA片段有限,通常最多為15kb左右,因為當質粒大於15kb時,轉化效率明顯下降。質粒載體與外源DNA重組原理見圖1。

⑩ 能從感染噬菌體的菌種中體質粒做轉化嗎

噬菌體是病毒的一種,其特別之處是專以細菌為宿主,較為人知的噬菌體是以大腸桿菌為寄主的T2噬菌體。跟別的病毒一樣,噬菌體只是一團由蛋白質外殼包裹的遺傳物質,大部分噬菌體還長有「尾巴」,用來將遺傳物質注入宿主體內。噬菌體是一種普遍存在的生物體,而且經常都伴隨著細菌。

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