pug6載體質粒圖譜

1. 質粒載體圖譜上面的英文分別代表什麼

中間質粒名字，pBR322是常用的一種，都是改造過可以查的
Apr和Tetr是抗氨苄和抗四環素
ROP應該是控制拷貝數ROI是合成生長素的兩個基因
還有一個origin of replication復制起始位點
其餘的都是酶切位點

2. pmirglo載體，質粒圖譜應該怎樣看

這個問題很突然啊，你要看它採用的是什麼啟動子，核糖體結合位點，是否是融合蛋白，多克隆位點，終止子，抗性標簽，帶不帶篩選標記。

3. 關於載體pBinGFP的質粒圖譜

http://genome-www.stanford.e/vectordb/vector_descrip/COMPLETE/PBIN19.SEQ.html

pBin19質粒的全序列。長度為回答11777bp。

4. 誰有慢病毒載體pVSVG質粒圖譜

慢病毒載體pVSVG為慢病毒表達載體，其後3-LTR區有polyA加尾信號，另外RV（包括LV）為RNA病毒，其基因組與mRNA共用同一模板

質粒圖譜如圖所示

5. 如何查找質粒圖譜

方法一：使用來Vector NT 軟體

做分子自實驗，經常和不同的質粒打交道，了解各種質粒的圖譜信息是必需的，invitrogen公司的這款軟體絕對是分子生物學蟲子們的福音，要想對質粒圖譜了解更直觀，安裝這款軟體是非常必要的。這款軟體的軟體包裡面會包括invitrogen公司的所有質粒圖譜信息和其他比較常見和經典的質粒圖譜。

方法二：查找質粒圖譜的網站

1. Vector Database（addgene）

這個網站很頁面很人性化，以前叫做lablife，現在網站做了整合，傳送h比如查找pRS類質粒圖譜（注意，是一類質粒圖譜，沒關系，照樣能找到），直接在搜索框輸入pRS，可以看到，之類質粒一共有三十多個。
找到自己需要的質粒名稱，點擊進入，就可以看到質粒圖譜了。

6. 質粒圖譜怎麼看

1.第一步，看箭頭：

大多數質粒都會有箭頭，箭頭有兩種解釋。一種是轉錄方向，轉錄方向主要是由啟動子開始的一個大箭頭，是啟動子啟動序列的順序。另一種是復制起始位點的方向，復制起始位點就是該質粒在大腸桿菌等細菌或真菌中DNA復制的一個方向。

還需要提到的是F1啟動子（圖上的f1 ori）代表的是噬菌體的復制起始方向，只能復制出單鏈的DNA哦，但是可以用來測序。看懂轉錄的方向，這樣就方便設計插入片段的位置和方向性。

2.第二步，看上面的標簽。

報告基因：通常會有一兩個蛋白，被用作報告基因，比如常見的copGFP（綠色熒光蛋白），Puro（嘌呤黴素），Lacz（乳糖操縱子）等等。和抗性基因不同，這樣的報告基因，並不是為了在大腸桿菌擴增質粒的過程中起作用的。

而是在質粒轉入表達體系後起到作用的，基本上就是為了顯示過表達或是敲減的基因是否正常運作。有的報告基因會融合在蛋白中表達，有的會另外用一個獨立的啟動子進行表達（比如shRNA的質粒中）。

3.第三步，看多克隆位點：

MCS（Multiple Cloning Site，也就是多克隆位點），一般圖中會把多克隆位點上的酶切位點都標記出來。上面的酶切位點順序，一般都是按照5`-3`的順序排列下來的，需要注意的是這樣幾點。

第一點是要注意，酶切位點邊標注了*的一般是指並不僅僅存在一個位點，也就不能用來作為構建質粒的酶切位點。

第二點需要注意的是，有的酶切位點，在序列中只有一個，但它上面也會標注一個*或者（dam），這說明可能這個酶切位點會有CpG島的甲基化修飾[常見的是XbaI，TCTAG(6m)A中的TC無法切開]，一般也是不能用的。但是非要用這個酶切位點的話，就需要用非甲基化的感受態細胞，如JM109或者JM110。

4.第四步，看多克隆位點的序列：

末端如果有差異的話，可以把基因的ATG（甲硫氨酸）的5`末端替換1-2個鹼基（變成GTG或者GCG這樣），從第二個氨基酸序列開始完全一致即可。而配合擴增和酶切的話，插入片段是允許有3`末端的冗餘。

為了可以應付3`末端的冗餘鹼基，在多克隆位點序列後，會有解碼的終止TAA密碼，即使插入的片段使得3`末端產生了移碼突變，照樣能使表達的蛋白正常終止掉（在酵母雙雜的AD質粒中，由於插入的是隨機cDNA，所以AD的載體上會常見這樣的結構）。

(6)pug6載體質粒圖譜擴展閱讀

分類

1.根據質粒能否通過細菌的接合作用，可分為接合性質粒和非接合性質粒。

接合性質粒帶有與接合傳遞有關的基因。非接合質粒在一定條件下通過與其共存的接合質粒的誘動或轉導而傳遞。

2.根據質粒在細菌內的復制類型可分為兩類：嚴緊控制型和鬆弛控制型。

嚴緊控制復制型質粒的復制酶系與染色體DNA復制共用，只能在細胞周期的一定階段進行復制，當細胞染色體停止復制時，質粒也就不再復制。

鬆弛控制復制型的質粒的復制酶系不受染色體DNA復制酶系的影響，在整個細胞生長周期中隨時都可以復制，在染色體復制已經停止時質粒仍能繼續復制。

3.根據質粒的不相容性，可分為不相容性和相容性。

不相容性指結構相似、密切相關的質粒不能穩定地共存於同一宿主細菌內的現象，反之為相容性。常用於流行病學的調查。

7. 要畫一個質粒圖譜，在載體的名字下方要寫bp請問這個鹼基對是怎麼算的

有該質粒的全基因組測序嗎？
然後從啟動子或者復制起點開始，用軟體算算

8. 如何用電腦軟體繪制質粒圖譜

一個合格質粒的組成要素 復制起始位點Ori，即控制復制起始的位點。原核生物DNA 分子中只有一個復制起始點。而真核生物DNA 分子有多個復制起始位點。 抗生素抗性基因：可以便於加以檢測，如Amp+ ，Kan+ 多l 克隆位點：MCS 克隆攜帶外源基因片段 P/E：啟動子/增強子 Terms：終止信號 加poly（A）信號：可以起到穩定mRNA 作用 。

二、如何閱讀質粒圖譜

第一步：首先看Ori 的位置，了解質粒的類型（原核/真核/穿梭質粒） Ori 的箭頭指復制方向，其他元件標注的箭頭多指轉錄方向（正向）。

第二步：再看篩選標記，如抗性，決定使用什麼篩選標記：

（1）Ampr：水解β -內醯胺環，解除氨苄的毒性。

（2）tetr ：可以阻止四環素進入細胞。

（3）camr：生成氯黴素羥乙醯基衍生物，使之失去毒性。

（4）neor（kanr）：氨基糖苷磷酸轉移酶，使G418（卡那黴素衍生物）失活。

（5）hygr：使潮黴素β 失活。

第三步：看多克隆位點（MCS）。它具有多個限制酶的單一切點，便於外源基因的插入。如果在這些位點外有外源基因的插入，會導致某種標志基因的失活，而便於篩選。決定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。

第四步：再看外源 DNA 插入片段大小。質粒一般只能容納小於10Kb 的外源DNA 片段。

9. 如何閱讀分析質粒圖譜

一個合格質粒的組成要素 1. 復制起始位點Ori 即控制復制起始的位點。原核生物DNA分子中只有一個復制起始點。而真核生物DNA分子有多個復制起始位點。 2. 抗生素抗性基因 可以便於加以檢測，如Amp+ ,Kan+ 3. 多克隆位點MCS 克隆攜帶外源基因片段 4. P/E 啟動子/增強子 5. Terms 終止信號 6. 加poly(A)信號 可以起到穩定mRNA作用如何閱讀質粒圖譜 第一步：首先看Ori的位置，了解質粒的類型(原核/真核/穿梭質粒) 所謂穿梭質粒是指一類人工構建的具有兩種不同復制起點和選擇標記，因而可以在兩種不同類群宿主中存活和復制的質粒載體。此概念不僅用於不同的微生物菌群之間，也可以推廣到真核生物表達載體的構建，如用於枯草的pBE2、酵母的pPIC9K、哺乳動物表達載體pMT2 和用於植物細胞的Ti 質粒。這些穿梭質粒不僅可以在大腸桿菌中復制擴增，也可以在相應的枯草、酵母、動物或植物細胞中擴增和表達。這樣利於對質粒的分子生物學操作和大量制備。 第二步：再看篩選標記，如抗性，決定使用什麼篩選標記。 1. Ampr 水解β-內醯胺環，解除氨苄的毒性。 2. tetr 可以阻止四環素進入細胞。 3. camr 生成氯黴素羥乙醯基衍生物，使之失去毒性。 4. neor(kanr) 氨基糖苷磷酸轉移酶 使G418(長那黴素衍生物)失活 5. hygr 使潮黴素β失活。 第三步：看多克隆位點(MCS)。它具有多個限制酶的單一切點。便於外源基因的插入。如果在這些位點外有外源基因的插入，會導致某種標志基因的失活，而便於篩選。決定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。 第四步：再看外源DNA插入片段大小。質粒一般只能容納小於10Kb的外源DNA片段。一般來說，外源DNA片段越長，越難插入，越不穩定，轉化效率越低。 第五步：是否含有表達系統元件，即啟動子-核糖體結合位點-克隆位點-轉錄終止信號。這是用來區別克隆載體與表達載體。克隆載體中加入一些與表達調控有關的元件即成為表達載體。選用那種載體，還是要以實驗目的為准繩。啟動子-核糖體結合位點-克隆位點-轉錄終止信號 1. 啟動子-促進DNA轉錄的DNA順序，這個DNA區域常在基因或操縱子編碼順序的上游，是DNA分子上可以與RNApol特異性結合並使之開始轉錄的部位，但啟動子本身不被轉錄。 2. 增強子/沉默子-為真核基因組(包括真核病毒基因組)中的一種具有增強鄰近基因轉錄過程的調控順序。其作用與增強子所在的位置或方向無關。即在所調控基因上游或下游均可發揮作用。/沉默子-負增強子，負調控序列。